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¿Qué es FISH?

Hibridación por Fluorescencia in situ (FISH) es una técnica de laboratorio para determinar la presencia o ausencia de secuencias particulares de ADN o ARN en una muestra. La técnica utiliza sondas de ADN etiquetadas con fluoróforo para identificar las secuencias de ADN complementarias en la muestra. Se basa en la unión muy específica entre la secuencia de ADN de la sonda y la secuencia de ADN complementaria en la muestra. La hibridación o recocido de la sonda con la secuencia de nucleótidos celulares se visualiza mediante microscopía de fluorescencia.

llc fish

1.Astrazenaca, Global Molecular Diagnostics Methods, Module 2,2019:12-15

¿Qué es NGS?

Secuenciación de Nueva Generación (NGS) se refiere al procesamiento del ADN de la muestra para producir una biblioteca de plantillas de reacción de secuenciación. Los pasos incluyen:

  • Fragmentación
  • Selección de tamaño
  • Ligadura del adaptador
  • Amplificación a través de PCR
  • Fijación a una superficie sólida o perlas

llc ngs

1.Astrazenaca, Global Molecular Diagnostics Methods, Module 2,2019:12-15

¿Qué es estatus IGHV?

La Región Variable de las Cadenas Pesadas de Inmunoglobulinas (IGHV) codifica una parte del receptor de las células B (BCR) denominado región variable de cadena pesada1. Cada BCR en la formación de un anticuerpo integra una combinación de cadenas pesadas y cadenas livianas. Las regiones variables de las cadenas pesadas y livianas forman los sitios de unión al antígeno del anticuerpo1,2.

Durante el desarrollo de células B, ocurre un proceso denominado hipermutación somática donde las mutaciones se introducen en la región variable para producir anticuerpos que se unirán con mayor fuerza a los antígenos 2.

El estado de hipermutación somática del IGHV es un biomarcador fundamental para evaluar el pronóstico de los pacientes con leucemia linfocítica crónica (LLC) ya que es clave para la estratificación del riesgo en estos pacientes y predice las respuestas a la quimio inmunoterapia y los agentes dirigidos3.

Las guías de La Sociedad Europea de Oncología Médica, el Taller Internacional sobre Leucemia Linfocítica Crónica y la Red Nacional Integral del Cáncer (ESMO, iwCLL y NCCN por sus siglas en inglés) indican que este biomarcador debe evaluarse antes del tratamiento en todos los pacientes con LLC1. La LLC con IGHV no mutada está asociado a un pronóstico desfavorable y de mayor riesgo.

llc citometria de flujo

¿Qué son estereotipos en LLC?

Los estereotipos o subsets son secuencias de aminoácidos altamente homólogas en la región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina que es una región crítica para el reconocimiento antigénico4.

¿Por qué son importantes los estereotipos en LLC?

Los estereotipos o subsets tienen una implicación importante en el pronóstico de los pacientes con LLC y aportan información al profesional de salud para la toma de decisiones clínicas4.

SUBSET #1

2.4 % de todas las LLC

Muy agresivo (TTFT 1-9 años)

U-LLC

Niveles significativamente altos de EZH2

Mutaciones del gen NFKBIE recurrentes

Pronunciado BcR y señalización TLR

SUBSET #2

2.8 % de todas las LLC

Muy agresivo (TTFT 1-6 años)

Ambos U-LLC y M-LLC

Alta incidencia de del (11) (q22q23)

Enriquecimiento significativo de mutaciones SF3B1

Baja frecuencia de aberraciones TP53

SUBSET #4

1 % de todas las LLC

Muy indolente (TTFT 11 años)

M-LLC

Pocas aberraciones genéticas

SHM IG en curso, característica de anti-ADN Abs

Anergia característica de células B

SUBSET #8

0.5 % de todas las LLC

Muy agresivo, riesgo más alto de TR (TTFT 1-5 años)

U-LLC

Alta frecuencia de trisomía 12

Prevalencia de mutaciones NOTCH1

Antígeno promiscuo reactividad vinculante

Referencias:

  1. Fabbri G, Dalla-Favera R. The molecular pathogenesis of chronic lymphocytic leukaemia. Nat Rev Cancer. 2016;16(3):145-162.
  2. Murphy K. The generation of lymphocyte antigen receptors. In: Janeway's Immunobiology. 8th ed. New York, NY: Garland Science; 2012:157-200.
  3. Agathangelidis A., Chatzidimitriou A., Chatzikonstantinou T., Tresoldi C., Davis Z., Giudicelli V., Kossida S., Belessi C., Rosenquist R., Ghia P., W. Langerak A., Davi F., Stamatopoulos K. (2022). Immunoglobulin gene sequence analysis in chronic lymphocytic leukemia: the 2022 update of the recommendations by ERIC, the European Research Initiative on CLL.
  4. Stanganelli, Hematología Vol. 21 N.º Extraordinario: 405 412. Available at: 405-412 https://www.sah.org.ar/revistasah/numeros/vol21/extra3/51-vol21-extra_noviembre.pdf
  5. Stamatopoulos, K et al. Leukemia 31, 282-291 (2017)

A CONTINUACIÓN

Perfil del paciente y pruebas disponibles

¿Cuándo solicitar la prueba? La Prueba debe ser solicitada al momento de la sospecha clínica de LLC. Existen dos tipos de pruebas principales: Panel diagnóstico y Panel pronóstico.

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